PicoGreen熒光染料可對DNA樣品進(jìn)行定量
更新時(shí)間:2019-09-10 點(diǎn)擊次數:2731
PicoGreen熒光染料法是一種靈敏的雙鏈DNA檢測方式,通過(guò)Modulus檢測儀可以檢測到pg級的微量DNA。這種方法主要用來(lái)測定微量的DNA殘留,或對DNA樣品進(jìn)行定量。
作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結合,產(chǎn)生熒光信號。PicoGreen技術(shù)可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度或相對熒光單位(RFU)的顯著(zhù)增加。其自發(fā)熒光忽略不計,重復性標準差異低,不受樣品化學(xué)成分的干擾。
Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料,常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來(lái)DNA濃度的測定在cDNA文庫的構建,DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測等領(lǐng)域中具有重要意義。疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關(guān)系到人類(lèi)的健康。
Picogreen僅在與DNA雙鏈結合后才發(fā)出熒光,且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個(gè)數量級范圍內呈線(xiàn)性,且幾乎無(wú)序列依賴(lài)性,可以地測量多個(gè)來(lái)源的DNA,包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物??捎脽晒夥止夤舛扔嫽驘晒饷笜藘x讀數,Ex/Em=480nm/520nm。