使用CCK-8要注意的事項有哪些
更新時(shí)間:2021-10-25 點(diǎn)擊次數:1398
CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)CCK8)試劑可用于簡(jiǎn)便而準確的細胞增殖和毒性分析。相信做細胞的同學(xué)對他都很熟悉,你確定你使用CCK-8試劑的方式是*正確的嗎?
1.酚紅和血清對CCK8法的檢測不會(huì )造成干擾,可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
2.CCK8可以檢測大腸桿菌,但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實(shí)驗每次測定的過(guò)程中需要避免細菌污染,以免影響結果。
3.當在培養箱內培養時(shí),培養板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā),由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,最外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。
4.在培養基中加入CCK8,培養一定的時(shí)間,測定450nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實(shí)驗時(shí),還應考慮藥物的吸收,可在加入藥物的培養基中加入CCK8,培養一定的時(shí)間,測定450nm的吸光度作為空白對照。
5.金屬對CCK8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì )抑制5%、15%、90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話(huà),將會(huì )100%抑制。
6.懸浮細胞由于染色比較困難,一般需要增加細胞數量和延長(cháng)培養時(shí)間。