外泌體的提取主要包括以下幾種方式
更新時(shí)間:2021-11-25 點(diǎn)擊次數:1673
外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。1983年,外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。
所有培養的細胞類(lèi)型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的分子機制剛剛開(kāi)始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長(cháng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng )診斷的開(kāi)發(fā)。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。
一是超速離心法,這是目前外泌體提取常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。
二是過(guò)濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。
三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時(shí),量少。
四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì )影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗。
五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。
六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不廣泛。