介紹細胞凍存的主要步驟
更新時(shí)間：2022-09-13 點(diǎn)擊次數：586
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時(shí)脫離生長(cháng)狀態(tài)而將其細胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再復蘇細胞用于實(shí)驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來(lái)購買(mǎi)、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時(shí)向培養基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開(kāi)始為-1到-2℃/min，當溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。
介紹細胞凍存的主要步驟：
細胞凍存
1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2.取對數生長(cháng)期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長(cháng)的細胞消化下來(lái)；
4.離心1000rpm，5min；
5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6.將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；
7.在凍存管上標明細胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間及操作者；
8.凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
微信咨詢(xún)
當前位置：