近年來(lái),通過(guò)輸注免疫細胞或干細胞進(jìn)行相關(guān)疾病的治療取得良好療效,細胞治療技術(shù)展示出越來(lái)越廣闊的臨床應用前景。通常細胞從采集到臨床應用會(huì )間隔很長(cháng)時(shí)間,而新鮮細胞產(chǎn)品保存時(shí)限較短,為了延長(cháng)細胞保存時(shí)限或長(cháng)期保存細胞產(chǎn)品,需要對細胞進(jìn)行冷凍后儲存。
細胞冷凍保存的原理
細胞凍存是通過(guò)冷凍保護機制將細胞放在低溫環(huán)境,減少細胞代謝,保持細胞活性,以便長(cháng)期儲存的一種技術(shù)。細胞復蘇后,蛋白質(zhì)仍有活性,細胞的結構和功能仍完好。
隨著(zhù)溫度降低,細胞內外的水分都會(huì )結晶,所形成的冰晶會(huì )造成細胞膜和細胞器的破壞,特別是0~-20℃的階段,冰晶呈針狀,極易引發(fā)細胞損傷。在不加任何保護劑條件下直接凍存細胞時(shí),細胞內外環(huán)境中形成的冰晶,能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等,引起細胞死亡。
如果在細胞溶液中加入冷凍保護劑,可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。冷凍保護劑容易同水分子結合,降低冰點(diǎn),在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水分在凍結形成冰晶前透出細胞,并且通過(guò)降低未結冰溶液中電解質(zhì)的濃度,使細胞免受溶質(zhì)損傷,細胞得以在超低溫(液氮)條件下保存。冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復溫速率有關(guān),且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。
細胞冷凍保護劑
細胞冷凍保護劑可以根據否穿透細胞膜分為滲透性和非滲透性?xún)煞N。滲透性冷凍保護劑可以透過(guò)細胞膜滲透到細胞內,多為小分子,包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇等,這類(lèi)保護劑能夠在細胞冷凍懸液凝固之前,穿過(guò)細胞膜滲透到細胞內,減少細胞內冰晶的形成,從而減少細胞損傷。DMSO是臨床級凍存保護劑中重要的成分,目前經(jīng)典的凍存保護劑中通常含有10%左右的DMSO。DMSO是常用的凍存保護劑和常用藥用輔料,在國家藥品監督管理局藥品審評中心藥用輔料數據庫可以查詢(xún)到其詳細信息。非滲透性冷凍保護劑一般是一些大分子物質(zhì),不能滲透到細胞內,主要包括右旋糖苷、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白等,其可以?xún)?yōu)先同溶液中的水分子相結合,使冰點(diǎn)降低,減少冰晶的形成。由于其分子量大,可以使溶液中電解質(zhì)濃度降低,從而減輕溶質(zhì)損傷,同時(shí)能降低溶液中低分子溶質(zhì)(電解質(zhì))濃度,減輕鹽損傷。
細胞冷凍保存的一般流程
細胞凍存過(guò)程要緩慢,復蘇則相反,應快速升溫。慢凍的原因如上所述,為了避免降溫時(shí),細胞內的水分還未來(lái)得及脫離細胞,但卻形成冰晶,對細胞造成損傷。(1)凍存前觀(guān)察細胞狀態(tài),測定細胞活率和計數。(2)將要凍存的細胞收集于離心管中,1200~1800rpm,離心5min,棄上清。(3)根據需要調整細胞凍存密度,緩慢加入適當體積配制好預冷的凍存液或市售的無(wú)血清細胞凍存液,重懸細胞。(4)將細胞懸液分裝至凍存管中,旋緊管蓋,做好標記。(5)將凍存管放入程序降溫盒(預冷)內,然后放至-80℃冰箱過(guò)夜,次日轉移至液氮罐中長(cháng)期保存。
如何選擇細胞凍存液
細胞凍存液的質(zhì)量和成分對細胞的凍存效果有很大的影響。如果細胞凍存液的成分不合適或質(zhì)量不達標,可能會(huì )導致細胞凍存失敗或細胞復蘇后存活率低。
選擇細胞凍存液時(shí),應考慮以下3個(gè)重要因素:
(1)細胞類(lèi)型,不同的細胞類(lèi)型對細胞凍存液的成分和濃度有不同的要求。
(2)凍存時(shí)間,細胞凍存的時(shí)間越長(cháng),對細胞凍存液的要求越高。
(3)復蘇率,細胞凍存液的質(zhì)量和成分對細胞的復蘇率有很大的影響。
下面給你介紹下李記生物~李記生物細胞凍存液的主要產(chǎn)品:
藥輔級細胞凍存液(非程序降溫)
快速細胞凍存液(GMP級)
無(wú)血清細胞凍存液(無(wú)DMSO)
無(wú)血清細胞凍存液(增強型)
快速細胞凍存液(無(wú)血清、無(wú)蛋白)
和元李記快速細胞凍存液(無(wú)血清、無(wú)蛋白)可適應于絕大部分腫瘤細胞和常規細胞,大部分干細胞(和元李記已測試細胞種類(lèi)請關(guān)注),凍存細胞可在 -80℃ 長(cháng)期保存(>6年)。不含動(dòng)物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類(lèi)細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營(yíng)養成分,提高細胞存活率和活力,亦適合于無(wú)血清培養細胞和蛋白表達細胞。
無(wú)需程序性降溫,可直接將細胞放入凍存液置于-80℃冰箱(-80℃可保存>6年),凍存液無(wú)需稀釋。
凍存液不含血清,大大降低細胞污染可能性。
不要加血清,不要反復逐級降溫,不要液氮,綜合下來(lái)省時(shí)更省錢(qián)。
案列可于-資源支持查詢(xún)!
各細胞凍存數據,可參考下方李記凍存液數據庫(數據由使用客戶(hù)反饋)
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
快速細胞凍存液(無(wú)血清、無(wú)蛋白) | AC05L032 | 30mL |
快速細胞凍存液(無(wú)血清、無(wú)蛋白) | AC05L033 | 100mL |
常溫運輸。4℃保存,有效期24個(gè)月。
產(chǎn)品描述
李記生物無(wú)血清細胞凍存液(無(wú)DMSO)適用于多種細胞的冷凍保存,尤其適用于原代肝細胞、神經(jīng)細胞等的凍存。
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
無(wú)血清細胞凍存液(無(wú)DMSO) | AC05L164 | 100mL |
產(chǎn)品參數
pH值: | 25±2℃時(shí),7.2-7.8 |
細菌: | 陰性 |
真菌: | 陰性 |
支原體: | 陰性 |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃密封保存,有效期12個(gè)月。
產(chǎn)品描述
李記生物無(wú)血清細胞凍存液(增強型)適用于常用動(dòng)物細胞系的冷凍保存,尤其適用于原代細胞、干細胞等的冷凍保存。
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
無(wú)血清細胞凍存液(增強型) | AC05L053 | 100mL |
產(chǎn)品參數
外觀(guān): | 淡黃色澄清溶液 |
pH值: | 25±2℃時(shí),7.2-7.8 |
細菌: | 陰性 |
真菌: | 陰性 |
支原體: | 陰性 |
內毒素: | <1 EU/mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃密封保存,有效期24個(gè)月。
和元李記快速細胞凍存液(GMP級)不含動(dòng)物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類(lèi)細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。通用于各種動(dòng)物細胞株,尤其適用于各類(lèi)原代細胞、干細胞及雜交瘤等蛋白表達細胞的凍存。
本產(chǎn)品含多種保護劑、穩定劑組合,可顯著(zhù)降低凍存過(guò)程中溶液冰點(diǎn),提高細胞膜對水的通透性,有效防止冰晶對細胞的損傷;同時(shí)降低冰凍時(shí)細胞周?chē)娊赓|(zhì)濃度,避免電解質(zhì)損傷;還可延緩凍存過(guò)程中細胞的互相擠壓,保護細胞膜。從而極大提高細胞復蘇率和活力。
便捷:即用型,無(wú)需程序性降溫,可直接將細胞放入凍存液置于-80℃冰箱,也可在后續轉移至液氮中進(jìn)行長(cháng)期保存。
高效:細胞存活率和復蘇活力高,普遍高于90% 。
安全:無(wú)血清,無(wú)動(dòng)物源成分,化學(xué)成分明確,大大降低細胞污染可能性。
質(zhì)優(yōu):嚴格的質(zhì)量控制,產(chǎn)品性能媲美進(jìn)口;所有原料均選自經(jīng)嚴格檢測的低內毒素、高純藥用級別原料,采用低DMSO配方,注射用水配置符合GMP生產(chǎn)。
批間差異?。?/span>全程于GMP潔凈車(chē)間生產(chǎn)與包裝,并經(jīng)過(guò)嚴格的內毒素、滲透壓、 PH、細菌病原體等質(zhì)量檢測,確保產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。
適用范圍廣:通用于各種動(dòng)物細胞株,尤其適用于各類(lèi)原代細胞、干細胞及雜交瘤等蛋白表達細胞的凍存;已通過(guò)實(shí)驗證明不不會(huì )影響干細胞表型和生長(cháng)狀態(tài),且可維持干細胞的多分化性。
案列可于-資源支持查詢(xún)!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
快速細胞凍存液(GMP級) | AC05L043 | 100mL |
藍冰運輸。4℃保存,有效期12個(gè)月。
產(chǎn)品描述
藥輔級細胞凍存液(非程序降溫)是由李記生物自主研發(fā)的含有7.5% DMSO,無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物成分的即用型細胞凍存液,在超低溫(-80℃~-196℃)環(huán)境下為細胞提供一個(gè)安全、有效的保護環(huán)境,凍存復蘇后細胞活率可達90%以上。
本產(chǎn)品含有甘氨酸,DMSO以及磷酸鹽緩沖液的水溶液,適用于間充質(zhì)干細胞的冷凍保存。
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
藥輔級細胞凍存液(非程序降溫) | AC05L174 | 100mL |
產(chǎn)品參數
外觀(guān): | 澄清透明溶液 |
裝量: | 應不低于標示裝量 |
pH值: | 7.0~7.6(25±2℃) |
滲透壓: | 1650~2025 mOsmol/Kg |
無(wú)菌: | 應無(wú)菌生長(cháng) |
支原體: | 應符合規定 |
內毒素: | <0.25EU/mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃密封保存,有效期24個(gè)月。
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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