蛋白Marker即蛋白分子量標準,是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物,像“尺子"一樣用來(lái)指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在Western Blot實(shí)驗中,蛋白Marker主要是用來(lái)指示蛋白條帶所對應的分子量大小,此外,蛋白Marker還可以用來(lái)輔助判斷蛋白轉膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進(jìn)度等作用,所以選擇合適的蛋白Marker也是實(shí)驗成功的重要條件之一。
李記生物預染蛋白分子量標準
預染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀(guān)分子量,以上2個(gè)圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為 SDS-PAGE 和 Western Blot 的蛋白質(zhì)分子量標準??捎糜赟DS-PAGE和Western Blot實(shí)驗中蛋白分子量大小的參照。
蛋白Marker的分類(lèi)
• 未預染 Marker:非預染蛋白Marker在電泳過(guò)程中看不到,電泳結束后經(jīng)過(guò)蛋白染色后才能起指示作用,無(wú)法在實(shí)驗過(guò)程中起預示作用。但是由于蛋白沒(méi)有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準確。
• 預染 Marker:含染料和蛋白,肉眼看見(jiàn),可直接觀(guān)察電泳進(jìn)程和轉膜是否完quan,較為常用。但 Marker 蛋白跟染料共價(jià)偶聯(lián)導致蛋白分子電泳的遷移效率發(fā)生改變,其指示的分子量不是精確值而有一定誤差。
• 曝光 Marker:在曝光步驟中,可將目的條帶和 Marker 條帶同時(shí)曝光顯示,減小誤差,并克服了預染 Marker 遷移率的改變,但價(jià)格昂貴。
蛋白Marker的選擇
• 范圍覆蓋
選擇蛋白 Marker 時(shí),確保其分子量范圍能夠覆蓋所要研究的目標蛋白的大小。一般來(lái)說(shuō),選擇分子量較小、中等和較大的標準,以涵蓋不同大小的蛋白。
• 雙標記 Marker
有些 Marker 是雙標記的,可以在電泳過(guò)程中染色,這樣的 Marker 適用于雙色標記(例如熒光和化學(xué)發(fā)光)的應用,提供更多的實(shí)驗選擇。
• 質(zhì)量和穩定性
選擇來(lái)自可靠供應商的高質(zhì)量和穩定的蛋白 Marker,確保其性能的一致性和準確性。
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