Western Blot (WB) 是分子生物學(xué)中常用的一種技術(shù)，主要用于檢測特定蛋白在樣本中的存在與表達水平。封閉液的主要作用是阻止一抗和二抗的非特異性結合，這對于減少背景噪音、提高信號對比度至關(guān)重要。沒(méi)有適當的封閉，即便是最jing細的實(shí)驗設計也可能因高背景信號而受到影響，導致數據解讀困難。
快速封閉液介紹
快速封閉液（即用型，免洗）是一款無(wú)蛋白成分快速 Western Blot 的封閉液，可用于高效快速的封閉轉膜后的 NC 或 PVDF 膜，可替代脫脂奶粉、BSA 等傳統封閉液，通用于常規抗體、磷酸化抗體、生物素標記抗體。其次整個(gè)封閉過(guò)程僅需10min，無(wú)需洗滌，即可直接孵育一抗；總體效果xian著(zhù)優(yōu)于傳統的基于牛血清白蛋白、脫脂奶粉、酪蛋白 等的封閉液及國外同類(lèi)產(chǎn)品。
快速封閉液特點(diǎn)
? 即用型封閉液，無(wú)需配制
? 封閉時(shí)間短，僅需10分鐘
? 背景低，信噪比高，優(yōu)于常規封閉的效果
? 不含哺乳動(dòng)物來(lái)源的蛋白，適用于磷酸化的抗體
快速封閉液實(shí)驗步驟
① 完成轉膜后，用Western洗滌液洗滌蛋白膜1-2 min 。
② 根據膜的大小，將一定體積的快封液倒入平皿或者其它適當容器中，確保封液后續能充分覆蓋膜即可。對于常規的 western，一張約 6.6×8.5cm 的膜推薦使用約 10mL 左右的快封液。
③ 用平頭鑷夾住膜的一角，將膜放置在 WB 無(wú)蛋白封閉液（1 X in TBST）中，使封閉液浸沒(méi)膜，置于水平搖床上封閉約 10 min（經(jīng)多種抗體的測試封閉 10 min的效果很多時(shí)候會(huì )顯著(zhù)優(yōu)于常規的BSA封閉1 h的效果）。
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