上海李記生物CCK-8試劑盒為進(jìn)口分裝產(chǎn)品,與日本同仁提供的CCK-8試劑盒幾乎*一模一樣,二者的實(shí)驗差異極小,但產(chǎn)品價(jià)格卻不到日本同仁cck-8的一半,保證質(zhì)量的同時(shí),擁有!我們的技術(shù)員及領(lǐng)導有著(zhù)將近30年的科研經(jīng)驗,知道哪些試劑能在市場(chǎng)中具有優(yōu)勢的同時(shí)保證實(shí)驗人員在實(shí)驗中能真正感覺(jué)到產(chǎn)品的質(zhì)量,我們在此鄭重承諾:如果產(chǎn)品質(zhì)量和日本同仁CCK-8相差較大,全額退款。
產(chǎn)品說(shuō)明
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞增殖與活性檢測試劑盒是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線(xiàn)粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan,參考圖1)。WST-8 被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養基中。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線(xiàn)性關(guān)系。
圖1:WST-8分子結構及檢測原理
運輸與保存方法:
冰袋運輸。CCK-8在4℃可保存一年,在-20℃可以存放數年,反復凍融會(huì )造成測定背景O.D值升高,如經(jīng)常使用,建議存放于4℃即可。
操作方法:
1. 在96孔板中配制100 μl的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(shí) (在37℃,5% CO2的條件下)。
2. 向培養板加入10 μl不同濃度的待測物質(zhì)。如果測定細胞活性,則不需要2-3步驟,直接從第四步操作。
3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時(shí)間 (例如: 6, 12, 24或48小時(shí))。
4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì )影響O.D值的讀數)。
5. 將培養板在培養箱內孵育1-4小時(shí)。
6. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
注意事項:
1)CCK-8試劑盒的檢測依賴(lài)于脫氫酶催化反應,如果待檢測體系中有較多還原劑(或抗氧化劑)會(huì )造成背景O.D值升高,干擾檢測結果。如果實(shí)驗中有還原劑,請檢查背景的O.D值,即測定、比較空白培養基加入藥物與不加藥物的培養基(含細胞)在加入CCK- 8試劑后的O.D值,如果空白O.D值明顯偏高,則說(shuō)明有反應,應設法去除或折算干擾因素。
2)如果細胞培養時(shí)間較長(cháng),培養基顏色發(fā)生變化,應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8檢測。細胞培養基酚紅不影響測定結果。
3)為使CCK-8試劑盒培養基充分混勻,減少CCK-8在移液器上的殘留,建議加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑,混勻后加樣。
4)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
CCK-8與同類(lèi)試劑比較
檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK法 |
產(chǎn)品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現配現用 | 即開(kāi)即用 | 即開(kāi)即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時(shí)間 | 較長(cháng) | 較短 | 較短 | zui短 |
檢測波長(cháng) | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
細胞毒性 | 高,細胞形態(tài)*消失 | 很低,細胞形態(tài)不變 | 很低,細胞形態(tài)不變 | 很低,細胞形態(tài)不變 |
試劑穩定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
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