SmartCell 線(xiàn)粒體染色試劑盒NIR

SmartCell 線(xiàn)粒體染色試劑盒NIR

產(chǎn)品描述

線(xiàn)粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數真核細胞中的兩層膜結構的細胞器，是細胞中的“能量工廠(chǎng)"(cellular power plants)",生產(chǎn)了細胞所需的大部分ATP，除了為細胞提供能量外，還涉及諸如細胞分化、細胞信息傳遞和細胞凋亡等過(guò)程，并擁有調控細胞生長(cháng)和細胞周期的能力。已有文獻報道，線(xiàn)粒體還與線(xiàn)粒體失調癥、心臟功能障礙、衰老等人類(lèi)疾病有關(guān)。盡管大部分細胞遺傳物質(zhì)DNA在細胞核內，但線(xiàn)粒體擁有獨立的基因組，呈現母性遺傳?；谝陨咸攸c(diǎn)，線(xiàn)粒體是生物、生命科技領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

Smart Cell染色試劑盒是Life-iLab公司專(zhuān)門(mén)研發(fā)的一類(lèi)熒光成像工具，試劑盒設計嚴謹，需人為手動(dòng)操作的步驟很少。可用來(lái)標記細胞器、亞細胞等結構，例如細胞膜、線(xiàn)粒體、線(xiàn)粒體和細胞核等。

Smart Cell線(xiàn)粒體染色試劑盒可以標記活細胞中的線(xiàn)粒體，使之帶紅色熒光(Ex/Em =640/659nm)(Cy5 filter) 。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，屬線(xiàn)粒體選擇性染料，該染料能輕易進(jìn)入活細胞內，通過(guò)線(xiàn)粒體膜電位變化滲透進(jìn)入線(xiàn)粒體，并在線(xiàn)粒體中富集。Smart Cell線(xiàn)粒體染色試劑盒提供了標記線(xiàn)粒體的全套試劑，能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析。這種高效的細胞標簽為從空間上和時(shí)間上研究發(fā)生的細胞活動(dòng)提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

使用方法

1. 準備線(xiàn)粒體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預熱MitoView NIR染料(Component A)。

1.2 取20µL預熱好的MitoView NIR染料(Component A)，用10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進(jìn)行稀釋。

注意：1) 20μL MitoView NIR染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實(shí)驗，剩余的MitoView NIR染料(Component A) 可以根據需要分裝避光保存于-20℃，避免反復凍融。2)染料濃度根據具體應用會(huì )有不同，染色條件根據細胞類(lèi)型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進(jìn)行調整優(yōu)化。

2. 細胞染色

2.1 貼壁細胞：在96孔板（100μL）或培養皿內培養細胞，當細胞達到70-80%融合度，在96孔板或培養皿內添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養細胞30分鐘-2小時(shí)。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長(cháng)培養基按1:1)替換色染液。同TRITC設置在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀(guān)察。

注意：如果細胞沒(méi)有充分染色，可以適當增加染料濃度或增加染色時(shí)間進(jìn)行改善

2.2 懸浮細胞: 在1000 rpm 條件下離心細胞培養液5分鐘，棄去上清，用預熱好的細胞培養液溫和的重懸細胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養細胞30分鐘-2小時(shí)。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長(cháng)培養基按1:1)替換色染液。同Cy5 設置在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀(guān)察。

圖1：HeLa 細胞用SmartCell線(xiàn)粒體染色試劑盒NIR染色后進(jìn)行成像分析

（所用96孔板為Costar black）