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簡(jiǎn)要描述：單鏈cDNA合成試劑盒（逆轉錄），包含熱穩定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分，僅需添加 RNA 模板和水即可啟動(dòng)反應，生成的 cDNA 主要用于后續的 qPCR 分析。
產(chǎn)品型號：AN33L718廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家更新時(shí)間：2024-09-13訪(fǎng) 問(wèn) 量：143相關(guān)文章
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| 品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AN33L718 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 20T、100T | 供貨周期 | 現貨 |
| 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高質(zhì)量的單鏈 cDNA 合成試劑盒，包含熱穩定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分，僅需添加 RNA 模板和水即可啟動(dòng)反應，生成的 cDNA 主要用于后續的 qPCR 分析。
提取的RNA 樣本常存在基因組DNA（gDNA）污染，可能導致gDNA 與 cDNA 在 qPCR 中同時(shí)擴增，影響定量準確性。本試劑盒通過(guò) dsDNase 高效去除gDNA，特異性降解雙鏈 DNA或DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈，并在逆轉錄溫度下快速不可逆失活。與傳統使用的 DNase I對比，無(wú)需額外 EDTA 處理，簡(jiǎn)化實(shí)驗流程，降低逆轉錄反應的抑制風(fēng)險。
本試劑盒可在同一管中進(jìn)行逆轉錄和gDNA去除兩個(gè)反應，操作簡(jiǎn)便，可有效降低復雜加樣過(guò)程造成的樣品污染和 RNA 降解的風(fēng)險。但若基因組污染嚴重程度，建議選擇采用去除gDNA 污染與逆轉錄分開(kāi)進(jìn)行的操作方法。
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L718 | 20T |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L719 | 100T |
產(chǎn)品組分
組分 | AN33L718（20T） | AN33L719（100T） |
A. All-in-One RT MasterMix | 80 μL | 400 μL |
B. dsDNase | 20 μL | 2*50 μL |
C. 10× dsDNase Bu?er | 40 μL | 200 μL |
D. Nuclease-Free Water | 400 μL | 2*1 mL |
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存，有效期24個(gè)月。
使用方法
1. 針對基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品（推薦方案）
① 于冰上配制如下反應體系：
試劑 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a . 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量 RNA 作為模板。
② 37℃溫育 2 min，以去除gDNA 污染；
③ 55℃溫育 15 min；
④ 反應結束后，85℃溫育 5 min 以終止反應；
⑤ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上，用于后續實(shí)驗；或立即保存于 -20℃。
2. 針對基因組 DNA 含量高的 RNA 樣品
(1) 基因組 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應體系：
試劑 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
dsDNase | 1 μl |
10× dsDNase Bu?er | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 10 μl |
a. 推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染；
注：若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴重，可適當延長(cháng) 37℃溫育時(shí)間至 5 min。
④ 65℃溫育 2 min，使 dsDNase 失活， 冰上放置。
(2) 第一鏈 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應體系：
試劑 | 使用量（實(shí)驗組） |
“實(shí)驗 (1)"反應產(chǎn)物 | 10 μl |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 50℃溫育 15 min；
注：若目標 RNA 不含 Poly(A) 結構，可預先 25℃溫育 10 min。
④ 反應結束后， 85℃溫育 5 min，以終止反應；
⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后續實(shí)驗。
注：cDNA 溶液置于 -20℃儲存，建議不超過(guò) 1 周；置于 -80℃可長(cháng)期儲存。
注意事項
1. 預混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物，適用于含有 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA，以及不含 Poly(A) 結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不適用于 miRNA 等小RNA模板。
2. 由于隨機引物會(huì )在RNA的任意位置啟動(dòng)逆轉錄，因此不建議使用本產(chǎn)品進(jìn)行真核生物全長(cháng)cDNA的克隆。
3. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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