DNA聚合酶是細胞復制DNA的重要作用酶，目前為止已發(fā)現有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ，都與DNA鏈的延長(cháng)有關(guān)。DNA聚合酶RNA聚合酶的相同點(diǎn)：都能以DNA為模板，從5'向3'進(jìn)行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應。DNA聚合酶RNA聚合酶的不同點(diǎn)：1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒(méi)有，當需要解開(kāi)雙鏈的...

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時(shí)脫離生長(cháng)狀態(tài)而將其細胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再復蘇細胞用于實(shí)驗。而細胞凍存步驟及細胞凍存液的選擇也是影響細胞凍存效率及解凍復蘇后細胞活力的主要條件。下面就以細胞凍存液為例講解細胞凍存原理及細胞凍存的步驟。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使...

慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱(chēng)結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類(lèi)型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著(zhù)特點(diǎn)是感染個(gè)體在出現典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長(cháng)達數年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱(chēng)為慢病毒。慢病毒包裝系統一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所...

細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。隨著(zhù)基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實(shí)驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規轉染技術(shù)可分為兩大類(lèi),一類(lèi)是瞬時(shí)轉染,一類(lèi)是穩定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細胞中可存在多個(gè)拷貝數,產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時(shí)內（依賴(lài)于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫...

溶酶體（Lysosomes）是動(dòng)物細胞中重要的細胞器,其存在的完整性與動(dòng)物生理病理均密切相關(guān)。溶酶體是真核細胞中為單層膜所包圍的細胞質(zhì)結構，內部pH4～5，含豐富的水解酶，具有細胞內的消化功能。新形成的初級溶酶體經(jīng)過(guò)與多種其他結構反復融合，形成具有多種形態(tài)的有膜小泡，并對包裹在其中的分子進(jìn)行消化。因此，溶酶體具有溶解或消化的功能，為細胞內的消化器官。溶酶體染色試劑盒可以標記活細胞中的溶酶體，使之帶綠色熒光(Ex/Em=405/505nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，...

這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細胞染色體DNA.本法對于冷凍時(shí)間長(cháng)、細胞質(zhì)和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細...