在細胞培養過(guò)程中,經(jīng)常加入5%-20%的
Gibco胎牛血清,最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜,影響后續實(shí)驗的結果,我們在實(shí)驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養293T細胞,效果非常好。但是有些細胞也會(huì )使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清,要根據具體細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。
為防止客戶(hù)由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細胞培養順利。
?。?)盡可能地減少血清凍融次數。
?。?)培養基無(wú)需37℃水浴。
?。?)培養基保持PH值7.0-7.2。
?。?)嚴格控制配制培養基的水質(zhì),容器定期刷洗。
?。?)掌握細胞傳代的時(shí)機,細胞切勿生長(cháng)過(guò)老。
1、化凍將血清從-20度冰箱中取出,室溫(或浸于自來(lái)水中)化凍(約需要30分鐘至2小時(shí),也可放于4度冰箱化凍過(guò)夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時(shí)保存)
2、滅活
?。?)放入室溫的水浴鍋內開(kāi)始加熱(同時(shí)放入一個(gè)空的血清瓶,內裝100ml自來(lái)水,插入一根溫度計,溫度監控以此為準)
?。?)當溫度計顯示56度時(shí),停止加熱,改為間斷加熱,維持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過(guò)56度,則:若仍未超過(guò)60度,且時(shí)間很短,比如不超過(guò)5分鐘,則仍可使用;若超過(guò)60度,或者時(shí)間較長(cháng),則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細胞的培養)
?。?)取出,自然冷卻至室溫(約需1-3小時(shí)),可分裝或-20度繼續凍存。
3、分裝
?。?)轉入無(wú)菌間,在超凈臺內將血清分裝入10ml離心管中(注意預先要將血清輕輕搖動(dòng)數周、混勻;用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡,則在酒精燈火焰上過(guò)一下))
?。?)放入-20度冰箱凍存
?。?)全部操作約需要4-6小時(shí)