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簡(jiǎn)要描述：NP40裂解液（帶抑制劑）對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。
產(chǎn)品型號：AP01L054廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家更新時(shí)間：2024-04-18訪(fǎng) 問(wèn) 量：1726相關(guān)文章
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| 品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
|---|---|---|---|
| 分子式 | / | 純度 | / |
| 分子量 | / | 貨號 | AP01L054 |
| 規格 | 100ml | 供貨周期 | 現貨 |
| 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫和的細胞組織裂解液，主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制。對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。適用于常規的Western、IP和co-IP等實(shí)驗蛋白樣品的制備。
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 | 價(jià)格 |
NP40裂解液（帶抑制劑） | AP01L054 | 100 mL | 228 |
產(chǎn)品組分
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品組成 | 包裝規格 |
| AP01L054 | NP40裂解液 | 100 mL |
| 磷酸酶抑制劑 | 2*1 mL | |
| PMSF | 1 mL | |
| 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2秒后，細胞就會(huì )被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細胞。充分裂解后應沒(méi)有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬(wàn)細胞/管，然后再裂解。具體NP-40裂解液的使用量參照表1。
2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細小的碎片；
(2) 融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項
然后同樣離心取上清，用于后續實(shí)驗。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
| 樣品種類(lèi) | 樣品來(lái)源 | 收獲細胞數 | RIPA用量 | 可制備樣品數 |
| 細胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
| 60 mm培養板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
| 90 mm培養板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
| 25 cm2培養瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
| 75 cm2培養瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
| 組織 | 20 mg組織塊 | 150-250 μL | 400-600 |
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